Предложение показывает, что, несмотря на стирку, рубашка осталась грязной. Это состояние, которое противоречит ожидаемому результату после стирки. Нужен союз, который выражает уступку или противоречие.
Сравним варианты:
Здесь требуется показать, что стирка не помогла. 'Although' (или 'even though') подходит, так как 'I have washed it twice' — это полное предложение, и оно противопоставляется состоянию рубашки.
Ответ: 2) although